武汉默沙克生物????科技有限公司是一家专门从事生物制剂研发与生产的企业。目前可提供各种抗1体、免疫学试剂盒、生化试剂、elisa试剂盒、分子生物学试剂等多用途多属种的---产品,服务涉及分子生物学、细胞生物学、免疫学等生命科学领域
7.为什么有的试剂盒是采用竞争elisa法?
小分子抗原或半抗原因为缺乏可作夹心法的两个以上的位点,因此不能用双抗1体夹心法进行测定,可以采用竞争法。其原理是标本中的抗原和固相载体上的抗原竞争生物素化抗1体上的结合位点,标本中抗原量含量愈多,结合在固相上的生物素化抗1体愈少,后的显色也愈浅,即显色深浅与样本中的抗原浓度成反比。小分子激1素等elisa测定多用此法。
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igg可被木瓜蛋白酶分解为三个区段,其中两个相同的区段称抗原结合片段(fab)。每个fab都保存结合抗原的能力,但只有一个抗原结合位点,是单价的,与抗原结合后不出现凝集或沉淀。另一区段称fc段,无抗1体活性,但具有igg特有的抗原性。
igg可被胃蛋白酶分解为两个片段,一个fab双体,称f(ab)2,能和两个相同的抗原结合;另一片段类似fc,随后被分解成小分子多肽,无生物活性。
igm是由五个单体组成的五聚体,elisa检测试剂盒,含 10个重链和10个轻链,具有10个抗原结合价,由于空间位置的影响,只表现为五个抗原结合价。igm分子量约为900000,igg分子量约为150000。
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3、 细胞培养上清
取细胞培养上清到离心管,1000×g离心20min,除去细胞碎片及杂质,取上清,-20℃或-80℃保存,避免反复冻融。
4、 细胞裂解液
1) 吸去培养板内的培养基,用胰酶---细胞,加适量培养基将细胞从培养板上吹下来。悬浮细胞可省略。
2) 收集细胞悬液,1000×g离心10min,弃去培养基,用预冷的pbs润洗3次。
3) 加入适量的预冷pbs或细胞裂解液(临用前加入蛋白酶抑1制剂)重悬细胞。通常6孔板一个孔的细胞量需要150~250μl pbs重悬。
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